همسان‌سازی و بیان نوترکیب دُمین انتهای کربوکسیل پروتئین اینتیمین پاتوژن EHEC در باکتری اشرشیا کلی سویه BL21(DE3)

  چکیده   زمینه و هدف: بخشی از عفونت‌های روده‌ای به‌واسطه پاتوژن‌هایی به‌وجود می‌آ‌یند               که با مصرف مواد غذایی آلوده وارد سیستم گوارش انسان می‌شوند. در لانه‌گزینی باکتری         E. coli O157:H7 در روده بزرگ مجموعه‌ای از پروتئین‌ها که برخی از آنها شروع‌کننده این فرآیند بوده و فقدان آنها مانع از این پدیده می‌شود، دخیل هستند. هدف از انجام این پژوهش همسان‌سازی و بیان نوترکیب پلی‌پپتید انتهای کربوکسیل پروتئین اینتیمین به طول 311 اسید آمینه به‌عنوان کاندید واکسن علیه E. coli O157:H7 بوده است.   .   روش بررسی‌: طراحی پرایمر اختصاصی برای ژن eae با استفاده از نرم‌افزارOligo  نسخه 7 انجام شد و تکثیر ژن به‌وسیله واکنش PCR از روی DNA الگو صورت گرفت. واکنش‌های هضم آنزیمی ‌و الحاق ژن، درون وکتور pET28a(+) انجام شد. پس از تأیید همسان‌سازی ژن، بیان نوترکیب پروتئین اینتیمین با استفاده از القاگر IPTG صورت گرفت. برای تأیید پروتئین اینتیمین، آنالیز وسترن بلات انجام شد.   یافته‌ها: همسان‌سازی ژن eae درون وکتور pET28a(+) به شکل مناسب بین جایگاه‌های مطلوب انجام شد و پروتئین اینتیمین پس از القا، بیان نوترکیب مناسب و قابل‌توجهی را نشان داد. آنتی‌بادی مورد استفاده در وسترن بلات نیز توانست به شکل مناسبی اینتیمین را شناسایی کند.   نتیجه‌گیری: در این مطالعه، سازه پایدار محتوی ژن eae ساخته شد که بیان نوترکیب قابل‌توجهی از پروتئین اینتیمین را از خود نشان داد. بنابراین، این سازه را می‌توان برای تولید پروتئین اینتیمین جهت مطالعات ایمنی‌زایی علیه E. coli O157:H7 به‌کار برد.